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田楓凍干機(jī):微生物菌種如何真空冷凍干燥保存

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田楓凍干機(jī):微生物菌種如何真空冷凍干燥保存?步驟如下:

①準(zhǔn)備安培管 

   用于真空冷凍菌種保藏的安培管宜采用中性玻璃制造,形狀可用長(zhǎng)頸球形底的,亦稱淚滴型安培管。大小要求外徑6~7.5mm,長(zhǎng)105 mm,球部直徑9~11 mm,壁厚0.6~1.2 mm,也可用沒有球部的管狀安培管。塞好棉塞,在壓力0.11MPa,溫度121℃條件下滅菌30min后備用。
②準(zhǔn)備菌種 

   用真空冷凍干燥法保藏的菌種保藏期可長(zhǎng)達(dá)幾年甚至幾十年,為了不出現(xiàn)差錯(cuò),所用菌種純度要高,而且菌齡要適宜。細(xì)菌和酵母菌的菌齡要求超過對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,若用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌種進(jìn)行保藏,其存活期反而降低。一般細(xì)菌的菌齡要求24~48h;酵母菌為3d;形成孢子的微生物則宜保藏孢子;放線菌和絲狀真菌菌齡為7~10d。timg.jpg

③制備菌懸液與分裝 

   以細(xì)菌斜面為例,用脫脂牛乳2mL左右加入試管中,制成濃菌液,每支安培管分裝0.2mL。
④冷凍 

   微生物菌種用凍干機(jī),上海田楓有成套的裝置出售,可直接真空冷凍干燥(直接在凍干機(jī)內(nèi)原位干燥,④和⑤步驟結(jié)合)。

   此處介紹的是簡(jiǎn)易的方法與裝置,可達(dá)到同樣的目的。
   將分裝好的安培管放低溫冰箱中凍結(jié),無低溫冰箱可用冷凍劑如干冰(固體CO2)酒精液或干冰丙酮液,溫度可達(dá)-70℃。將安培管插入冷凍劑,只需冷凍幾分鐘,即可使懸液結(jié)冰。
⑤真空干燥 

   為在真空干燥時(shí)使樣品保持凍結(jié)狀態(tài),需準(zhǔn)備冷凍槽,槽內(nèi)放碎冰和食鹽,混合均勻,可冷至-15℃。安培瓶冷凍槽的干燥瓶?jī)?nèi)。

凍干機(jī)

⑥抽氣 

   一般若在30min內(nèi)能達(dá)到93.3Pa(0.7mmHg)真空度時(shí),則干燥物不致溶化,以后繼續(xù)抽氣,幾小時(shí)內(nèi),肉眼可觀察到被干燥物以趨干燥,一般抽到真空度26.7Pa(0.2mmHg),保持壓力6~7h即可。

⑦封口 

   抽真空干燥后,取出安培瓶,接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管繼續(xù)抽氣,約10min即可達(dá)到26.7Pa(0.2mmHg)。于真空狀態(tài)下,以煤氣噴燈的細(xì)火焰在安培管頸中央進(jìn)行封口。封口以后,保存于冰箱或室溫暗處。
   此法為菌種保藏方法中最有效的方法之一,對(duì)一般生活力強(qiáng)的微生物及其孢子都適用,即使對(duì)一些很難保存的致病菌,如腦膜炎球與淋病球菌等亦能保存。此法適用于菌種的長(zhǎng)期保存,一般可保存數(shù)年至幾十年。


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