田楓凍干機(jī)：微生物菌種如何真空冷凍干燥保存？步驟如下：

①準(zhǔn)備安培管 

   用于真空冷凍菌種保藏的安培管宜采用中性玻璃制造，形狀可用長(zhǎng)頸球形底的，亦稱淚滴型安培管。大小要求外徑6～7.5mm，長(zhǎng)105 mm，球部直徑9～11 mm，壁厚0.6～1.2 mm，也可用沒(méi)有球部的管狀安培管。塞好棉塞，在壓力0.11MPa，溫度121℃條件下滅菌30min后備用。
②準(zhǔn)備菌種 

   用真空冷凍干燥法保藏的菌種保藏期可長(zhǎng)達(dá)幾年甚至幾十年，為了不出現(xiàn)差錯(cuò)，所用菌種純度要高，而且菌齡要適宜。細(xì)菌和酵母菌的菌齡要求超過(guò)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，若用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌種進(jìn)行保藏，其存活期反而降低。一般細(xì)菌的菌齡要求24～48h；酵母菌為3d；形成孢子的微生物則宜保藏孢子；放線菌和絲狀真菌菌齡為7～10d。

③制備菌懸液與分裝 

   以細(xì)菌斜面為例，用脫脂牛乳2mL左右加入試管中，制成濃菌液，每支安培管分裝0.2mL。
④冷凍 

   微生物菌種用凍干機(jī)，上海田楓有成套的裝置出售，可直接真空冷凍干燥（直接在凍干機(jī)內(nèi)原位干燥，④和⑤步驟結(jié)合）。

   此處介紹的是簡(jiǎn)易的方法與裝置，可達(dá)到同樣的目的。
   將分裝好的安培管放低溫冰箱中凍結(jié)，無(wú)低溫冰箱可用冷凍劑如干冰（固體CO2）酒精液或干冰丙酮液，溫度可達(dá)－70℃。將安培管插入冷凍劑，只需冷凍幾分鐘，即可使懸液結(jié)冰。
⑤真空干燥 

   為在真空干燥時(shí)使樣品保持凍結(jié)狀態(tài)，需準(zhǔn)備冷凍槽，槽內(nèi)放碎冰和食鹽，混合均勻，可冷至－15℃。安培瓶冷凍槽的干燥瓶?jī)?nèi)。

⑥抽氣 

   一般若在30min內(nèi)能達(dá)到93.3Pa（0.7mmHg）真空度時(shí)，則干燥物不致溶化，以后繼續(xù)抽氣，幾小時(shí)內(nèi)，肉眼可觀察到被干燥物以趨干燥，一般抽到真空度26.7Pa（0.2mmHg），保持壓力6~7h即可。

⑦封口 

   抽真空干燥后，取出安培瓶，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管繼續(xù)抽氣，約10min即可達(dá)到26.7Pa（0.2mmHg）。于真空狀態(tài)下，以煤氣噴燈的細(xì)火焰在安培管頸中央進(jìn)行封口。封口以后，保存于冰箱或室溫暗處。
   此法為菌種保藏方法中最有效的方法之一，對(duì)一般生活力強(qiáng)的微生物及其孢子都適用，即使對(duì)一些很難保存的致病菌，如腦膜炎球與淋病球菌等亦能保存。此法適用于菌種的長(zhǎng)期保存，一般可保存數(shù)年至幾十年。

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